Condiciones generales para el cultivo de microorganismos

Por Quistián García Hylary

a) Disponibilidad de nutrientes adecuados: Un cultivo adecuado para la investigación microbiológica ha de contener como mínimo: carbono, nitrógeno, azufre, fosforo y sales  inorgánicas. En muchos casos serán necesarias ciertas vitaminas y otras sustancias inductoras del crecimiento.  Ciertas bacterias tienen necesidades nutritivas específicas, por lo que se añade a muchos medios sustancias como sueros, sangre, etc. Muy a menudo se añaden ciertos colorantes, bien como indicadores de ciertas actividades metabólicas o por sus capacidades de ejercer como inhibidores selectivos de ciertos microorganismos.

b) Consistencia adecuada del medio: partiendo de un medio líquido podemos modificar su consistencia añadiendo productos como gelatina o agar, con lo que obtendríamos medios en estado semisólido o sólido. Los medios solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de que muchos microorganismos no se desarrollan adecuadamente a temperaturas inferiores al punto de fusión de este solidificante y de que otros tienen la capacidad de licuarla.

c) Presencia (o ausencia) de oxígeno y otros gases: gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmosfera con tensión de oxígeno normal. Algunas pueden obtener el oxígeno directamente de variados sustratos. Pero los microorganismos anaerobios estrictos sólo se desarrollarán adecuadamente en una atmósfera sin oxígeno ambiental. Los organismos microaerófilos crecen mejor en condiciones atmosféricas parcialmente anaerobias, mientras los anaerobios facultativos tienen un metabolismo capaz de adaptarse a cualquiera de las citadas condiciones.

d) Condiciones adecuadas de humedad: un nivel mínimo de humedad, tanto en el medio como en la atmosfera, es imprescindible para un buen desarrollo de las células vegetativas microbianas en los cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones mínimas en las estufas de cultivo a 35-37°C proporcionando una fuente adecuada de agua que mantenga la humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y evitar así que se deseque el medio.

e) Luz ambiental: la mayoría de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en presencia de la luz solar. Hay excepciones evidentes como sería el caso de los microorganismos fotosintéticos.

f) pH: la mayoría de los microorganismos se desarrollan mejor en medios con un pH neutro, aunque los hay que requieren medios más o menos ácidos. La presencia de ácidos o bases en cantidades que no impiden el crecimiento bacteriano, pueden sin embargo, inhibirlo o incluso alterar sus procesos metabólicos normales.

g) Temperatura: los microorganismos mesófilos crecen de forma óptica a temperaturas entre 15 y 43°C. Otros como los psicrófilos crecen a 0°C y los termófilos a 80°C o incluso temperaturas superiores (hipertermófilos).

h) Esterilidad del medio: todos los medios de cultivo deben estar perfectamente estériles para evitar la aparición de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el crecimiento bacteriano normal del o de los especímenes inoculados en dichos medios. 

Por Ramírez Hernández Jessica 

1. El sustrato de cultivo

“dependiente o independiente de anclaje”

1.1. Materiales usados como sustrato

a. Vidrio.

b. Plástico desechable.

c. Microsoportes ("microcarriers") .

d. Otros sustratos artificiales.

f. "Feeder layers".

g. Matrices tridimensionales.

h. Sustratos no adherentes.

i. Interfases líquido-gel o líquido-líquido

j. Haces microcapilares permeables

1.2 Recipientes de cultivo. plástico desechable

* placas de Petri (ventiladas)

* multiplacas.

* frascos de Roux -

* "roller bottles"

 2. La fase gaseosa

• Oxígeno
• Dióxido de carbono

3. Propiedades físicas

Las características del medio: pH, osmolaridad, Tª, viscosidad y T superficial

pH y capacidad tamponadora

* pH óptimo 7.4

Fibroblastos entre 7.4 y 7.7

Células transformadas 7.0 a 7.4

Células epidérmicas 5.5

* Indicador de pH el rojo fenol: - color rojo a pH 7.4

- naranja a pH 7.0

- amarillo a pH 6.5

- azul-rojo a pH 7.6

- púrpura a pH 7.8

•El medio de cultivo debe estar tamponado, evitar cambios bruscos de Ph.

Osmolaridad

• Amplia tolerancia frente a la osmolaridad del medio,

• Control mediante la determinación del punto de congelación ó  de la P de vapor

Temperatura

* tiene gran influencia en la tasa de crecimiento de las células

•Influye en pH del medio

Viscosidad

* determinada por el contenido en suero

* tiene poca influencia sobre el crecimiento

* Importante para evitar el daño celular

Tensión superficial

* baja

* alterada por aparición espumas

* Agente antiespumante

Por Ramos Franco Michelle

Disponibilidad de nutrientes adecuados

Todo cultivo necesita contener nutrientes adecuados como carbono, nitrógeno, azufre, fosforo, y sales inorgánicas. En ocasiones podrán ser necesarias algunos carbohidratos y sales minerales para primordial crecimiento

Consistencia adecuada del medio

Partiendo de un medio líquido podemos modificar su consistencia añadiendo productos como albomica gelatina agar. Con los anteriores podremos obtener un agar con estado sólido o semisólido, esto es de suma importancia ya que los medios sólidos son de uso universal, y a su vez proporcionan versatilidad y comodidad

Presencia (o ausencia) de oxigeno y gases

Gran  cantidad de bacterias pueden crecer en una atmosfera con tensión de oxigeno normal, mas sin embargo otros microorganismos anaerobias estrictos solo se pueden alcanzar a desarrollar adecuadamente gracias a una atmosfera con oxigeno ambiental

Condiciones adecuadas de humedad

Para un buen desarrollo de las células vegetativas microbianas en los cultivos es necesario un nivel de humead adecuada, ya sea en el medio de cultivo como en la atmosfera, dicha temperatura mínima desde 35-37 grados centígrados

Luz ambiental

La mayoría de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en presencia de luz solas

PH

La mayoría de los microorganismos se desarrollan mejor en medio con un pH

Temperatura

Los microorganismos meso filos crecen de forma óptima en temperaturas 15-43 grados centígrados otros como los psicrofilos crecen a 0.6 y termófilos a 80 grados

Esterilidad del medio

Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estériles para evitar la aparición de formas de vida

Por Rangel Osorio Hugo

1- disponibilidad de nutrientes adecuados

Un medio de cultivo adecuado para la investigación microbiológica ha de contener, como mínimo, carbono, nitrógeno, azufre, fósforo y sales inorgánicas. En muchos casos serán necesarias ciertas vitaminas y otras sustancias inductoras del crecimiento. Siempre han de estar presentes las sustancias adecuadas para ejercer de donantes o captadores de electrones para las reacciones químicas que tengan lugar.

Todas estas sustancias se suministraban originalmente en forma de infusiones de carne, extractos de carne o extractos de levadura. Sin embargo, la preparación de estas sustancias para su aplicación a los medios de cultivo provocaba la pérdida de los factores nutritivos lábiles.

Actualmente, la forma más extendida de aportar estas sustancias a los medios es utilizar peptona que, además, representa una fuente fácilmente asequible de nitrógeno y carbón ya que la mayoría de los microorganismos, que no suelen utilizar directamente las proteínas naturales, tienen capacidad de atacar los aminoácidos y otros compuestos más simples de nitrógeno presentes en la peptona.

Ciertas bacterias tienen necesidades nutritivas específicas por lo que se añade a muchos medios sustancias como suero, sangre, líquido ascítico, etc. Igualmente pueden ser necesarios ciertos carbohidratos y sales minerales como las de calcio, magnesio, manganeso, sodio o potasio y sustancias promotoras del crecimiento, generalmente de naturaleza vitamínica.

Muy a menudo se añaden al medio de cultivo ciertos colorantes, bien como indicadores de ciertas actividades metabólicas o bien por sus capacidades de ejercer de inhibidores selectivos de ciertos microorganismos.

2- consistencia adecuada del medio

Partiendo de un medio líquido podemos modificar su consistencia añadiendo productos como albúmina, gelatina o agar, con lo que obtendríamos medios en estado semisólido o sólido.

Los medios solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de que muchos microorganismos no se desarrollan adecuadamente a temperaturas inferiores al punto de fusión de este solidificante y de que otros tienen la capacidad de licuarla.

Actualmente los medios sólidos son de uso universal, por su versatilidad y comodidad, pero hay también gran cantidad de medios líquidos cuyo uso está ampliamente extendido en el laboratorio.

3- presencia (o ausencia) de oxígeno y otros gases

Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmósfera con tensión de oxígeno normal. Algunas pueden obtener el oxígeno directamente de variados sustratos. Pero los microorganismos anaerobios estrictos sólo se desarrollarán adecuadamente en una atmósfera sin oxígeno ambiental. En un punto intermedio, los microorganismos microaerófilos crecen mejor en condiciones atmosféricas parcialmente anaerobias (tensión de oxígeno muy reducida), mientras los anaerobios facultativos tienen un metabolismo capaz de adaptarse a cualquiera de las citadas condiciones.

4- condiciones adecuadas de humedad

Un nivel mínimo de humedad, tanto en el medio como en la atmósfera, es imprescindible para un buen desarrollo de las células vegetativas microbianas en los cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones mínimas en las estufas de cultivo a 35-37ºC proporcionando una fuente adecuada de agua que mantenga la humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y evitar así que se deseque el medio.

5- Luz ambiental

La mayoría de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sería el caso de los microorganismos fotosintéticos.

6- pH

La concentración de iones hidrógeno es muy importante para el crecimiento de los microorganismos. La mayoría de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH neutro, aunque los hay que requieren medios más o menos ácidos. No se debe olvidar que la presencia de ácidos o bases en cantidades que no impiden el crecimiento bacteriano pueden sin embargo inhibirlo o incluso alterar sus procesos metabólicos normales.

7- Temperatura

Los microorganismos mesófilos crecen de forma óptima a temperaturas entre 15 y 43ºC. Otros como los psicrófilos crecen a 0ºC y los temófilos a 80ºC o incluso a temperaturas superiores (hipertemófilos). En líneas generales, los patógenos humanos crecen en rangos de temperatura mucho más cortos, alrededor de 37ºC, y los saprofítos tienen rangos más amplios.

8- Esterilidad del medio

Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estériles para evitar la aparición de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el crecimiento microbiano normal del o de los especimenes inoculados en dichos medios. El sistema clásico para esterilizar los medios de cultivo es el autoclave (que utiliza vapor de agua a presión como agente esterilizante).

Por Rascón Castrejón Lizeth

·         Disponibilidad de nutrientes adecuados

Todo cultivo necesita contener los nutrientes que son carbono, nitrógeno, azufre, fosforo y sales inorgánicas. En ocasiones podrán ser necesarios algunos carbohidratos y sales minerales para un primordial crecimiento.

·         Consistencia adecuada del medio

Partiendo de un medio líquido podemos modificar su consistencia añadiendo productos como albúmina, gelatina o agar. Con los anteriores podremos obtener un agar con estado sólido o semisólido, esto es de suma importancia ya que los medios solidos son de uso universal, y a su vez proporcionan versatilidad y comodidad.

·         Presencia (o ausencia) de oxígeno y otros gases

 Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmósfera con tensión de oxígeno normal, más sin embargo otros microorganismos anaerobios estrictos solo se pueden alcanzar un desarrollo adecuado gracias a una atmosfera son oxigeno ambiental.

·         Condiciones adecuadas de humedad

 Para un buen desarrollo de las células vegetativas microbianas en los cultivos es necesario un nivel de humedad adecuada, ya sea en el medio de cultivo como en la atmosfera, dicha temperatura mínima es de 35-37 C.

·         Luz ambiental

La mayoría de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en presencia de luz solar

·         pH

La mayoría de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH 

·         Temperatura

 Los microorganismos mesófilos crecen de forma óptima a temperaturas entre 15 y 43ºC. Otros como los psicrófilos crecen a 0ºC y los temófilosa 80ºC o incluso a temperaturas superiores (hipertemófilos). En líneas genérales, los patógenos humanos crecen en rangos de temperatura mucho más cortos, alrededor de 37ºC, y los saprofitos tienen rangos más amplios.

·         Esterilidad del medio

 Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estériles para evitar la aparición de formas de vida

Técnicas y Métodos de estriado en caja y tubo (medios de cultivo)

Por Quistián García Hylary

a) Estriado básico: Se calienta el asa de inoculación hasta que quede color rojo intenso para eliminar cualquier microorganismo, dejar que el asa se enfrié durante 3-5 segundos. Recoger una muestra del cultivo bacteriano a partir de un caldo o una placa Petri. Levantar la tapa de la placa Petri que se va a sembrar en un ángulo de 45°, colocar el asa en la parte de atrás de la caja, tocar con el asa el medio y pasarlo a través de la superficie de la placa con un movimiento en forma de S desde atrás hacia adelante.

b) Estriado para aislar: implica una sola inoculación de una sección de la placa Petri y a continuación disminuir la colonia arrastrando microorganismos de la sección inicial de dos a tres secciones adicionales, achicando eficazmente la población de microorganismos.

c) Estriado por cuadrantes: se divide la parte inferior de la caja Petri en cuatro partes iguales con un marcador. Se esteriliza el asa y se estría el 1er cuadrante con el procedimiento básico de S. Se trabaja en el sentido de las agujas del reloj, estriando cuadrante por cuadrante, esterilizando el asa antes de seguir a otro.

d) En tubo: esterilizar el asa como ya se mencionó anteriormente. Tomar la porción de muestra con el asa. Con la mano opuesta a la que sujeta el asa tomar el tubo por la parte inferior. Con el dedo meñique de la mano con la que sostiene el asa, retirar el tapón de algodón o la tapa de rosca del tubo, y reténgala, no la coloque en la mesa de trabajo. Flamee de inmediato la boca del tubo de ensayo, pasándola una o dos veces por la llama del mechero, con el objetivo de eliminar por incineración los microorganismos contaminantes que se encuentren en esa zona. Introducir el asa con la muestra en el tubo. A partir de aquí la siembra se puede realizar de distintas maneras:

·         Deslizando el asa desde el fondo hacia arriba, por toda la superficie de la cuña trazando una línea longitudinal.

·         Deslizando el asa por la superficie de la cuña desde el fondo hacia arriba, imprimiéndole un movimiento de zigzag.

·         Moteando toda la superficie de la cuña con un hisopo.

Al concluir la siembra se flamea y se taponea nuevamente el tubo procediendo a esterilizar el asa en el mechero.

Por Ramírez Hernández Jessica

Técnicas estériles

Las placas de Petri son un ambiente rico en nutrientes, por lo que es importante la utilización de técnicas estériles en todo momento. Nunca dejes a una placa de Petri abierta. Siempre expón a tu asa de inoculación a las llamas antes y después de transferir las bacterias de un medio a otro. Algunos laboratorios pueden requerir el uso de una máscara o trabajar dentro de una campana de tiro descendente para reducir al mínimo los contaminantes ambientales.

Técnica de estriado básico

Calienta el asa de inoculación hasta que quede de color rojo intenso para eliminar cualquier microorganismo. Deja que el asa se enfríe durante 20 o 30 segundos, pero no lo soples para no reintroducir microorganismos. Recoge una muestra del cultivo bacteriano a partir de un caldo o una placa de Petri. No necesitas de una presencia bacteriana visible. Levanta la tapa de la placa de Petri que vas a sembrar en un ángulo de 45 grados, coloca el asa en la parte de atrás del plato, toca con el asa en el medio y pásalo a través de la superficie de la placa con un movimiento en forma de S desde atrás hacia adelante. Algunos laboratorios pueden querer que gires la placa a 90 grados y repitas el procedimiento de inoculación para una cobertura completa.

Estriar para aislar

Estriar para aislar implica una sola inoculación de una sección de la placa de Petri y a continuación, disminuir la colonia arrastrando microorganismos de la sección inicial de dos o tres secciones adicionales, achicando eficazmente la población de microorganismos. Generalmente utilizado para separar un cultivo mixto de las bacterias, los bacteriólogos también utilizan este método para aislar una línea de bacterias que nacen de un solo progenitor.

Estriado en T

Para llevar a cabo con precisión un estriado en T, dibuja una "T" en la parte posterior de la placa de Petri. Voltea la tapa de la placa hacia abajo y, con un marcador permanente, divídela por la mitad. A continuación, dibuja una línea divisoria en una de las mitades para dividirla hasta formar una "T". Gira la placa de manera que la sección más grande quede a tu derecha. Inocula el asa de acuerdo con el procedimiento anterior. Levanta la tapa e inocula el medio con el barrido en forma de S, pero no cruces la línea media. Vuelve a calentar el asa para matar cualquier microorganismo. Gira el asa a la izquierda hasta que la primera de las secciones más pequeñas quede en la esquina inferior derecha. Comienza barriendo en forma de S en la esquina derecha de la primera sección que estriaste, en la nueva sección. Pon el asa al calor de la llama hasta que quede de color rojo intenso para eliminar cualquier microorganismo. Gira la placa una vez más y repite el barrido en S de la segunda sección a través de la tercera.

SIEMBRA EN AGAR INCLINADO EN TUBO DE ENSAYE.

El agar, una sustancia similar a la gelatina que se extrae de las algas rojas, es usado comúnmente para cultivar microorganismos. Se le agregan varios nutrientes para favorecer el crecimiento bacteriano y se coloca tanto en placas planas como en tubos de ensayo. Cuando se coloca en un tubo de ensayo, el agar está en forma líquida. Estos luego son colocados en ángulo para que se enfríen y solidifiquen, creando una superficie inclinada, o un agar inclinado (agar slant, en inglés).

INCLINACIÓN

Los medios de agar inclinado se realizan llevando el agar a punto de ebullición y vertiéndolo en un tubo de ensayo. Antes de que el agar se enfríe y solidifique, el tubo de ensayo se coloca inclinado sobre un lado. Una vez que el agar se enfría, el tubo puede volver a colocarse en posición vertical y el agar que se encuentra en su interior se verá inclinado.

El inóculo se siembra, con ayuda de ansa, de la siguiente manera:

• En profundidad con ansa de punta: se pica con el ansa el cultivo a sembrar y se introduce mediante punsión en el medio contenido en la parte inferior del tubo

• En superficie con ansa de aro: se pica con el ansa el cultivo a sembrar y se esparce el mismo sobre la superficie en bisel en forma de zigzag.

Por Ramos Franco Michelle

¿Cuál es el propósito de estriar una placa de agar?

Los estudios que implican los cultivos microbianos a menudo requieren la identificación de los organismos presentes en un cultivo. Cuando una pequeña porción de este cultivo se inserta en un medio nutriente que contiene agar, es posible mezclar una mezcla de bacterias individuales en unidades que forman colonias.

Materiales

Estriar una placa de agar requiere placas de agar nutrientes, un asa para la inoculación, un cultivo de bacterias, una disolución desinfectante como lysol al 10%y un mechero de bunsen. También tendrás que vestir ropa de seguridad como una bata de laboratorio, y lentes de seguridad contra productos químicos. El inoculo para rayar se toma a partir del cultivo stock bacteriano utilizando el asa y estriando atraves de las placas de agar nutriente.

Métodos-técnicas

• Estriado básico

Calienta el asa de inoculación *hasta que quede de color rojo intenso para eliminar cualquier microorganismo. Deja que el asa se enfrié durante 20 o 30 segundos pero no lo soples para no reintroducir microorganismos. Recoge una muestra de cultivo bacteriano a partir de un caldo o de una placa petri, no necesitas una presencia bacteriana visible. Levanta la placa de petri, que vas a sembrar en un ángulo de 45 grados, coloca el asa en la parte de atrás del plato, toca con el asa en el medio y pásalo atraves de la superficie de la placa con un movimiento en forma de ``S`` de atrás hacia adelante.

• Estriar para aislar

Implica una sola inoculación de una sección de la placa petri y a continuación, disminuir la colonia arrastrando microorganismos de la sección inicial de dos otras secciones adicionales, achicando eficazmente la población de microorganismos generalmente utilizado para separar un cultivo mixto de las bacterias, los bactemotogos también utilizan este método para aislar una línea de bacterias que nacen de un solo progenitor

• Estriado en ``T``

Para Llevar a cabo con precisión un estriado en T, dibuja una T en la parte posterior de la placa petri. Voltea la tapa de la placa hacia abajo, con un marcador permanente, divídela por la mitad. Dibuja una línea divisora en una de las mitades hasta formar una T. jira la placa de manera que la sección más grande quede a tu derecha. Inocula el asa de acuerdo con el procedimiento anterior. Levanta la tapa e inocula le medio con el barrido en forma de S pero no crucen la línea media.

• Estriado por cuadrantes

Este es un método de estriado para el aislamiento, pero utiliza cuatro secciones en lugar de 3. Divide la parte inferior de la placa Petri en 4 partes iguales con un marcador permanente. Utiliza los procedimientos básicos de estriado para inocular el primer cuadrante. Trabajo en el sentido de las agujas del reloj, llevando los microorganismos de un cuadrante a otro como lo hiciste en el método de estratificado en T y calentado el asa antes de inocular el siguiente cuadrante. Calienta el asa y barre en forma de S desde el uno hasta el cuadrante adyacente.

ESTRIADO EN TUBO (INOCULACIÓN EN TUBO)

Por estrías

1)      Coger el asa por el cabo, introducirla directamente en la zona de color azul de la llama del mechero hasta que se ponga al rojo vivo. Seguidamente se produce a introducir lentamente el resto del alambre para lograr el mismo efecto

2)      Retire el instrumento de la llama y espero de 4 a 5 seg. Con el objetivo de que el asa enfrié

3)      Con el asa estéril y fría tome el volumen o fragmento de la muestra que será sembrado y trasládelo de inmediato para el medio de cultivo selectivo.

4)      Con la mano puesta a la que sujeta el asa tome el tubo para la porción inferior. Con el dedo meñique de la mano que sostiene el asa y retire del tubo del tapón de algodón a la tapa de rosca y retegola

5)      Flamee de inmediato la boca del tubo de ensayo pasándola y o dos veces por la llama del mechero, con el objetivo de eliminar incineración, los microorganismo contaminantes que se encuentran en esa zona, por la parte externa del tubo

6)      Introduzca el asa con el volumen o fracción de la muestra en el tubo, hasta el fondo de la cuña  a partir de este punto la siembra puede realizarse de diferentes maneras.

¨      Deslizando el asa, desde el fondo hacia arriba por toda la superficie de la cuña trazando una línea longitudinal

¨      Deslizando el asa por la superficie de la cuña desde el fondo hacia arriba, impidiéndole o movimiento de zigzag

¨      Motiando toda la superficie con un hisopo

¨      Efectuado cualquiera de las 3 bonotes explicadas pero adicionalmente rotándolo en medio con el asa, haciendo un pequeño corte longitudinal

7)      Al concluir las siembra se flamea la boca y se toponea nuevamente el tubo procesando a esterilizar el asa en las llamas del mechero

Por Rangel Osorio Hugo

Estriado en tubos de ensayo.

·         Siembra en tubos de cultivo con medio sólido

Las siembras en tubos con medio sólido, por lo general se emplean para la conservación de un cultivo puro proveniente de una placa o para la siembra de pruebas bioquímicas como el medio OF, SIM y MIO. El pico del tubo. Del medio con agar se inocula primero por punción (cuando es necesario), seguido por una estría en el pico del tubo desde el fondo a la parte superior con un movimiento en “S” a medida que se retira el asa.

·         Siembra en medios de cultivo líquidos.

La siembra en tubos de cultivo en medio líquido, el tubo debe inclinarse en un ángulo de 30 ° y el asa de inoculación debe tocar la superficie interna del vidrio, justo encima del punto donde la superficie del agar forma un ángulo agudo. Cuando el tubo es vuelto a su posición vertical, el área de inoculación queda sumergida debajode la superficie, se puede agitar suavemente el asa en el interior del medio líquido.

Tipos de cultivo en tubos de ensayo:

·         Siembra por estrías en superficie:

Se utilizan los medios de cultivo inclinados, se toma una muestra de alguna colonia con el asa estéril y sobre la superficie del medio se desliza ésta en forma de estrías.Se siembra el material  en la superficie del agar inclinado en un tubo de ensayo,  allí se extiende por toda la superficie con el asa bacteriológica, previamente esterilizada y cargada con el material a sembrar, haciendo estrías no muy amplias, pero tampoco muy estrechas. Se inicia por la parte más profunda de la superficie inclinada  y se termina la estría en la parte más cerca de la boca del tubo.

·         Por picadura o punción:

Se utilizan los medios de cultivo en un tubo solidificado en forma inclinada y en forma recta, se toma la colonia y se introduce en el medio picándolo longitudinalmente. Con una aguja se toma el material que se quiere sembrar y se lo introduce en el tubo, con medio semisólido. Introducir la aguja hasta el fondo, formando un canal de punción, trayecto por el cual la retiraremos luego. Este método se utiliza para estudiar la movilidad de las bacterias. sufinalidad es  estudiar la movilidad de las bacterias

·         Siembra en TSI:

(Por picadura y estrías en superficie): el TSI (Triple Sugar Iron) es un medio que contiene glucosa, sacarosa y lactosa, hierro y un indicador que es el rojo fenol.

En este medio se siembra  por picadura y estrías en superficie, para estudiar los cambios que ocurran  en  la superficie y profundidad.

·         Siembra por dilución:

Se toma el tubo de ensayo con medio líquido, como el caldo simple. Se toma el material a diluir y se siembra en el  tubo con el uso del asa cargada con el  material bacteriológico, se agita, con movimientos moderados. Su finalidad es poner la bacteria en suspensión.

Por Rascón Castrejón Lizeth

¿Cuál es el propósito de estriar una placa de agar?

Los estudios que implican cultivos microbianos a menudo requieren la identificación de los organismos presentes en un cultivo. Cuando una pequeña porción de ese cultivo se inserta en un medio nutriente que contiene agar, es posible separar una masa de bacterias individuales en unidades que forman colonias. Cada una de estas unidades se desarrolla en colonias discretas que muestran características que ayudan a identificar el organismo.

Métodos - Técnicas

1) Estriado básico

Calienta el asa de inoculación hasta que quede de color rojo intenso para eliminar cualquier microorganismo. Deja que el asa se enfríe durante 20 o 30 segundos, Recoge una muestra del cultivo bacteriano a partir de un caldo o una placa de Petri. Levanta la tapa de la placa de Petri que vas a sembrar en un ángulo de 45 grados, coloca el asa en la parte de atrás del plato, toca con el asa en el medio y pásalo a través de la superficie de la placa con un movimiento en forma de S desde atrás hacia adelante.

2) Estriar para aislar

Estriar para aislar implica una sola inoculación de una sección de la placa de Petri y, disminuir la colonia arrastrando microorganismos de la sección inicial de dos o tres secciones adicionales, achicando eficazmente la población de microorganismos. Generalmente utilizado para separar un cultivo mixto de las bacterias, los bacteriólogos también utilizan este método para aislar una línea de bacterias que nacen de un solo progenitor.

3) Estriado en T

Dibuja una "T" en la parte posterior de la placa de Petri. Voltea la tapa de la placa hacia abajo y, con un marcador permanente, divídela por la mitad. A continuación, dibuja una línea divisoria en una de las mitades para dividirla hasta formar una "T". Gira la placa de manera que la sección más grande quede a tu derecha. Inocula el asa de acuerdo con el procedimiento anterior. Levanta la tapa e inocula el medio con el barrido en forma de S, pero no cruces la línea media. Vuelve a calentar el asa para matar cualquier microorganismo. Gira el asa a la izquierda hasta que la primera de las secciones más pequeñas quede en la esquina inferior derecha. Comienza barriendo en forma de S en la esquina derecha de la primera sección que estriaste, en la nueva sección. Pon el asa al calor de la llama hasta que quede de color rojo intenso para eliminar cualquier microorganismo. Gira la placa una vez más y repite el barrido en S de la segunda sección a través de la tercera.

4) Estriado por cuadrantes

Este es también un método de estriado para el aislamiento, pero utiliza cuatro secciones en lugar de tres. Divide la parte inferior de la placa de Petri en cuatro partes iguales con un marcador permanente. Utiliza los procedimientos básicos de estriado para inocular el primer cuadrante. Trabaja en el sentido de las agujas del reloj, llevando los microorganismos de un cuadrante a otro, como lo hiciste con el método del estratificado en T y calentando el asa antes de inocular el siguiente cuadrante. Calienta el asa y barre en forma de S desde el primero hasta el cuadrante adyacente.

Por Reyes Marcial Luis Diego

Los estudios que implican cultivos microbianos a menudo requieren la identificación de los organismos presentes en un cultivo. Cuando una pequeña porción de ese cultivo se inserta en un medio nutriente que contiene agar, es posible separar una masa de bacterias individuales en unidades que forman colonias. Cada una de estas unidades se desarrolla en colonias discretas que muestran características que ayudan a identificar el organismo.

Estriado en caja.

Instrumental.

·         Placas de agar nutrientes

·         Asa

·         Cultivo de bacterias

·         Solución desinfectante

·         Mechero bunsen

·         Equipo de seguridad

Métodos y técnicas.

I. Estriado básico. Se calienta el asa de inoculación hasta que quede de color rojo intenso para eliminar cualquier microorganismo. Dejar que se enfrié por 20 o 30 segundos. Recoge una muestra del cultivo bacteriano. Levanta la tapa de la placa petri que vas a sembrar en un ángulo de 45 grados, toca con el asa en el medio y pásalo a través de la superficie de la placa con un movimiento en forma de S desde atrás hacia adelante.

II. Estriar para aislar. Estriar para aislar implica una sola inoculación de una sección de la placa de Petri y a continuación, disminuir la colonia arrastrando microorganismos de la sección inicial de dos o tres secciones adicionales, achicando eficazmente la población de microorganismos. Generalmente utilizado para separar un cultivo mixto de las bacterias, los bacteriólogos también utilizan este método para aislar una línea de bacterias que nacen de un solo progenitor.

III. Estriado en T. Para llevar a cabo con precisión un estriado en T, dibuja una "T" en la parte posterior de la placa de Petri. Voltea la tapa de la placa hacia abajo y, con un marcador permanente, divídela por la mitad. A continuación, dibuja una línea divisoria en una de las mitades para dividirla hasta formar una "T". Gira la placa de manera que la sección más grande quede a tu derecha. Inocula el asa de acuerdo con el procedimiento anterior. Levanta la tapa e inocula el medio con el barrido en forma de S, pero no cruces la línea media. Vuelve a calentar el asa para matar cualquier microorganismo. Gira el asa a la izquierda hasta que la primera de las secciones más pequeñas quede en la esquina inferior derecha. Comienza barriendo en forma de S en la esquina derecha de la primera sección que estriaste, en la nueva sección. Pon el asa al calor de la llama hasta que quede de color rojo intenso para eliminar cualquier microorganismo. Gira la placa una vez más y repite el barrido en S de la segunda sección a través de la tercera.

IV. Estriado por cuadrantes. Este es también un método de estriado para el aislamiento, pero utiliza cuatro secciones en lugar de tres. Divide la parte inferior de la placa de Petri en cuatro partes iguales con un marcador permanente. Utiliza los procedimientos básicos de estriado para inocular el primer cuadrante. Trabaja en el sentido de las agujas del reloj, llevando los microorganismos de un cuadrante a otro, como lo hiciste con el método del estratificado en T y calentando el asa antes de inocular el siguiente cuadrante. Calienta el asa y barre en forma de S desde el primero hasta el cuadrante adyacente.

Estriado en tubo.

Los medios en tubo pueden presentarse sólidos en forma inclinada, caldo o bien como medios semisólidos. De acuerdo al procedimiento de inoculación puede emplearse el asa o la aguja para inoculación. Generalmente se emplea el asa para inocular especímenes en placa y la aguja de inoculación para la transferencia de cultivos puros de placas a tubos con medio sólido.

Existen muchas fórmulas de caldos, dependiendo de la bacteria que se desee crecer. En los tubos con medio sólido, el tubo se pone a enfriar en posición inclinada, de manera que al solidificar queda la superficie inclinada. Los tubos inclinados son útiles para el cultivo de aerobios y anaerobios facultativos. Las características del cultivo tales como pigmento son fáciles de observar en este tipo de cultivo. Los procedimientos para inocular caldos, tubos inclinados y por picadura serán demostrados antes de que se lleven a cabo.

Instrumental.

·         Asa y aguja bacteriológica

·         Tubos con medios de cultivo

·         Placas con medio de cultivo

·         Mechero bunsen

Métodos y técnicas.

INOCULACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO.

1. Flamee el asa o aguja por unos segundos en forma vertical.

2. Quite el tapón del tubo y manténgalo en la misma mano en que tiene el asa o aguja para inoculación. Flamee la boca del tubo y tome una pequeña porción de inoculó.

3. Flamee nuevamente la boca del tubo que tiene el espécimen que va a trasferir y tápelo.

4. Quite el tapón del tubo que va a inocular y proceda de acuerdo de acuerdo al medio de cultivo:

Caldo: Basta con tocar el medio con el asa o aguja, si es poco caldo inclínelo de manera que no introduzca en el tubo el mango del asa o aguja.

Medio semisólido: por lo general para este medio se usa la aguja de inoculación la cual se introduce dentro del medio hasta aproximadamente ¾ partes de profundidad. En un solo movimiento.

Medio sólido inclinado: se lleva el asa o la aguja hasta donde empieza el declive y se sube haciendo un movimiento de zigzag sobre la superficie dibujando así una serie de estrías.

Por Ríos Palacios Selene

Método de siembra para aislamiento por agotamiento o en estría

Materiales

• Placa petri con medio de cultivo
• Muestra (sólida o líquida)
• Asa de siembra de platino

Con el asa estéril tomamos la muestra y hacemos extensiones en la placa. Volvemos a esterilizar el asa de siembra y extendemos parte de la extensión anterior en otra dirección. Volvemos a esterilizar el asa de siembra y volvemos a extender parte de la segunda extensión en otra dirección. Esterilizamos y repetimos la operación. Incubamos a 37 º durante 24 horas y, en la primera zona, habrá un amasijo de células. En la segunda, parte de la primera zona estará mejor extendida, y en la tercera y en la 4ª mejor aún. Si tomamos una colonia y la ponemos sobre una placa petri, tendremos un cultivo puro.

• Estría única: depositamos la muestra lo más alejado de nosotros y realizamos la siembra en forma de zig-zag. De esta forma vamos descargando la muestra del asa. Es importante no volver a repasar el trozo de medio de cultivo que ya hemos sembrado. Para conseguir que al final de la estría tengamos colonias aisladas es importante que al principio hagamos la estría más junta y que la cantidad de muestra tomada en el asa sea la adecuada.
• Estría múltiple: en esta técnica de aislamiento por agotamiento se realizan varias estrías. Esto se puede llevar a cabo flameando el asa de paso en paso, es decir, de estría en estría, o sin flamear el asa. Además, dependiendo de la forma en la que hagamos las estrías, existen varios tipos de estriados:
• Estriado sobre cuatro cuadrantes: Se utiliza cuando queremos conservar algún microorganismo que nos interesa. Consiste en sembrar uno a uno los cuadrantes, sin flamear el asa entre estría y estría, de tal forma que en el cuarto cuadrante, al ir agotando la muestra del asa, tendremos los microorganismos aislados.