Condiciones generales para el cultivo de microorganismos

Por Quistián García Hylary

a) Disponibilidad de nutrientes adecuados: Un cultivo adecuado para la investigación microbiológica ha de contener como mínimo: carbono, nitrógeno, azufre, fosforo y sales  inorgánicas. En muchos casos serán necesarias ciertas vitaminas y otras sustancias inductoras del crecimiento.  Ciertas bacterias tienen necesidades nutritivas específicas, por lo que se añade a muchos medios sustancias como sueros, sangre, etc. Muy a menudo se añaden ciertos colorantes, bien como indicadores de ciertas actividades metabólicas o por sus capacidades de ejercer como inhibidores selectivos de ciertos microorganismos.

b) Consistencia adecuada del medio: partiendo de un medio líquido podemos modificar su consistencia añadiendo productos como gelatina o agar, con lo que obtendríamos medios en estado semisólido o sólido. Los medios solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de que muchos microorganismos no se desarrollan adecuadamente a temperaturas inferiores al punto de fusión de este solidificante y de que otros tienen la capacidad de licuarla.

c) Presencia (o ausencia) de oxígeno y otros gases: gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmosfera con tensión de oxígeno normal. Algunas pueden obtener el oxígeno directamente de variados sustratos. Pero los microorganismos anaerobios estrictos sólo se desarrollarán adecuadamente en una atmósfera sin oxígeno ambiental. Los organismos microaerófilos crecen mejor en condiciones atmosféricas parcialmente anaerobias, mientras los anaerobios facultativos tienen un metabolismo capaz de adaptarse a cualquiera de las citadas condiciones.

d) Condiciones adecuadas de humedad: un nivel mínimo de humedad, tanto en el medio como en la atmosfera, es imprescindible para un buen desarrollo de las células vegetativas microbianas en los cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones mínimas en las estufas de cultivo a 35-37°C proporcionando una fuente adecuada de agua que mantenga la humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y evitar así que se deseque el medio.

e) Luz ambiental: la mayoría de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en presencia de la luz solar. Hay excepciones evidentes como sería el caso de los microorganismos fotosintéticos.

f) pH: la mayoría de los microorganismos se desarrollan mejor en medios con un pH neutro, aunque los hay que requieren medios más o menos ácidos. La presencia de ácidos o bases en cantidades que no impiden el crecimiento bacteriano, pueden sin embargo, inhibirlo o incluso alterar sus procesos metabólicos normales.

g) Temperatura: los microorganismos mesófilos crecen de forma óptica a temperaturas entre 15 y 43°C. Otros como los psicrófilos crecen a 0°C y los termófilos a 80°C o incluso temperaturas superiores (hipertermófilos).

h) Esterilidad del medio: todos los medios de cultivo deben estar perfectamente estériles para evitar la aparición de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el crecimiento bacteriano normal del o de los especímenes inoculados en dichos medios. 

Por Ramírez Hernández Jessica 

1. El sustrato de cultivo

“dependiente o independiente de anclaje”

1.1. Materiales usados como sustrato

a. Vidrio.

b. Plástico desechable.

c. Microsoportes ("microcarriers") .

d. Otros sustratos artificiales.

f. "Feeder layers".

g. Matrices tridimensionales.

h. Sustratos no adherentes.

i. Interfases líquido-gel o líquido-líquido

j. Haces microcapilares permeables

1.2 Recipientes de cultivo. plástico desechable

* placas de Petri (ventiladas)

* multiplacas.

* frascos de Roux -

* "roller bottles"

 2. La fase gaseosa

• Oxígeno
• Dióxido de carbono

3. Propiedades físicas

Las características del medio: pH, osmolaridad, Tª, viscosidad y T superficial

pH y capacidad tamponadora

* pH óptimo 7.4

Fibroblastos entre 7.4 y 7.7

Células transformadas 7.0 a 7.4

Células epidérmicas 5.5

* Indicador de pH el rojo fenol: - color rojo a pH 7.4

- naranja a pH 7.0

- amarillo a pH 6.5

- azul-rojo a pH 7.6

- púrpura a pH 7.8

•El medio de cultivo debe estar tamponado, evitar cambios bruscos de Ph.

Osmolaridad

• Amplia tolerancia frente a la osmolaridad del medio,

• Control mediante la determinación del punto de congelación ó  de la P de vapor

Temperatura

* tiene gran influencia en la tasa de crecimiento de las células

•Influye en pH del medio

Viscosidad

* determinada por el contenido en suero

* tiene poca influencia sobre el crecimiento

* Importante para evitar el daño celular

Tensión superficial

* baja

* alterada por aparición espumas

* Agente antiespumante

Por Ramos Franco Michelle

Disponibilidad de nutrientes adecuados

Todo cultivo necesita contener nutrientes adecuados como carbono, nitrógeno, azufre, fosforo, y sales inorgánicas. En ocasiones podrán ser necesarias algunos carbohidratos y sales minerales para primordial crecimiento

Consistencia adecuada del medio

Partiendo de un medio líquido podemos modificar su consistencia añadiendo productos como albomica gelatina agar. Con los anteriores podremos obtener un agar con estado sólido o semisólido, esto es de suma importancia ya que los medios sólidos son de uso universal, y a su vez proporcionan versatilidad y comodidad

Presencia (o ausencia) de oxigeno y gases

Gran  cantidad de bacterias pueden crecer en una atmosfera con tensión de oxigeno normal, mas sin embargo otros microorganismos anaerobias estrictos solo se pueden alcanzar a desarrollar adecuadamente gracias a una atmosfera con oxigeno ambiental

Condiciones adecuadas de humedad

Para un buen desarrollo de las células vegetativas microbianas en los cultivos es necesario un nivel de humead adecuada, ya sea en el medio de cultivo como en la atmosfera, dicha temperatura mínima desde 35-37 grados centígrados

Luz ambiental

La mayoría de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en presencia de luz solas

PH

La mayoría de los microorganismos se desarrollan mejor en medio con un pH

Temperatura

Los microorganismos meso filos crecen de forma óptima en temperaturas 15-43 grados centígrados otros como los psicrofilos crecen a 0.6 y termófilos a 80 grados

Esterilidad del medio

Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estériles para evitar la aparición de formas de vida

Por Rangel Osorio Hugo

1- disponibilidad de nutrientes adecuados

Un medio de cultivo adecuado para la investigación microbiológica ha de contener, como mínimo, carbono, nitrógeno, azufre, fósforo y sales inorgánicas. En muchos casos serán necesarias ciertas vitaminas y otras sustancias inductoras del crecimiento. Siempre han de estar presentes las sustancias adecuadas para ejercer de donantes o captadores de electrones para las reacciones químicas que tengan lugar.

Todas estas sustancias se suministraban originalmente en forma de infusiones de carne, extractos de carne o extractos de levadura. Sin embargo, la preparación de estas sustancias para su aplicación a los medios de cultivo provocaba la pérdida de los factores nutritivos lábiles.

Actualmente, la forma más extendida de aportar estas sustancias a los medios es utilizar peptona que, además, representa una fuente fácilmente asequible de nitrógeno y carbón ya que la mayoría de los microorganismos, que no suelen utilizar directamente las proteínas naturales, tienen capacidad de atacar los aminoácidos y otros compuestos más simples de nitrógeno presentes en la peptona.

Ciertas bacterias tienen necesidades nutritivas específicas por lo que se añade a muchos medios sustancias como suero, sangre, líquido ascítico, etc. Igualmente pueden ser necesarios ciertos carbohidratos y sales minerales como las de calcio, magnesio, manganeso, sodio o potasio y sustancias promotoras del crecimiento, generalmente de naturaleza vitamínica.

Muy a menudo se añaden al medio de cultivo ciertos colorantes, bien como indicadores de ciertas actividades metabólicas o bien por sus capacidades de ejercer de inhibidores selectivos de ciertos microorganismos.

2- consistencia adecuada del medio

Partiendo de un medio líquido podemos modificar su consistencia añadiendo productos como albúmina, gelatina o agar, con lo que obtendríamos medios en estado semisólido o sólido.

Los medios solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de que muchos microorganismos no se desarrollan adecuadamente a temperaturas inferiores al punto de fusión de este solidificante y de que otros tienen la capacidad de licuarla.

Actualmente los medios sólidos son de uso universal, por su versatilidad y comodidad, pero hay también gran cantidad de medios líquidos cuyo uso está ampliamente extendido en el laboratorio.

3- presencia (o ausencia) de oxígeno y otros gases

Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmósfera con tensión de oxígeno normal. Algunas pueden obtener el oxígeno directamente de variados sustratos. Pero los microorganismos anaerobios estrictos sólo se desarrollarán adecuadamente en una atmósfera sin oxígeno ambiental. En un punto intermedio, los microorganismos microaerófilos crecen mejor en condiciones atmosféricas parcialmente anaerobias (tensión de oxígeno muy reducida), mientras los anaerobios facultativos tienen un metabolismo capaz de adaptarse a cualquiera de las citadas condiciones.

4- condiciones adecuadas de humedad

Un nivel mínimo de humedad, tanto en el medio como en la atmósfera, es imprescindible para un buen desarrollo de las células vegetativas microbianas en los cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones mínimas en las estufas de cultivo a 35-37ºC proporcionando una fuente adecuada de agua que mantenga la humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y evitar así que se deseque el medio.

5- Luz ambiental

La mayoría de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sería el caso de los microorganismos fotosintéticos.

6- pH

La concentración de iones hidrógeno es muy importante para el crecimiento de los microorganismos. La mayoría de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH neutro, aunque los hay que requieren medios más o menos ácidos. No se debe olvidar que la presencia de ácidos o bases en cantidades que no impiden el crecimiento bacteriano pueden sin embargo inhibirlo o incluso alterar sus procesos metabólicos normales.

7- Temperatura

Los microorganismos mesófilos crecen de forma óptima a temperaturas entre 15 y 43ºC. Otros como los psicrófilos crecen a 0ºC y los temófilos a 80ºC o incluso a temperaturas superiores (hipertemófilos). En líneas generales, los patógenos humanos crecen en rangos de temperatura mucho más cortos, alrededor de 37ºC, y los saprofítos tienen rangos más amplios.

8- Esterilidad del medio

Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estériles para evitar la aparición de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el crecimiento microbiano normal del o de los especimenes inoculados en dichos medios. El sistema clásico para esterilizar los medios de cultivo es el autoclave (que utiliza vapor de agua a presión como agente esterilizante).

Por Rascón Castrejón Lizeth

·         Disponibilidad de nutrientes adecuados

Todo cultivo necesita contener los nutrientes que son carbono, nitrógeno, azufre, fosforo y sales inorgánicas. En ocasiones podrán ser necesarios algunos carbohidratos y sales minerales para un primordial crecimiento.

·         Consistencia adecuada del medio

Partiendo de un medio líquido podemos modificar su consistencia añadiendo productos como albúmina, gelatina o agar. Con los anteriores podremos obtener un agar con estado sólido o semisólido, esto es de suma importancia ya que los medios solidos son de uso universal, y a su vez proporcionan versatilidad y comodidad.

·         Presencia (o ausencia) de oxígeno y otros gases

 Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmósfera con tensión de oxígeno normal, más sin embargo otros microorganismos anaerobios estrictos solo se pueden alcanzar un desarrollo adecuado gracias a una atmosfera son oxigeno ambiental.

·         Condiciones adecuadas de humedad

 Para un buen desarrollo de las células vegetativas microbianas en los cultivos es necesario un nivel de humedad adecuada, ya sea en el medio de cultivo como en la atmosfera, dicha temperatura mínima es de 35-37 C.

·         Luz ambiental

La mayoría de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en presencia de luz solar

·         pH

La mayoría de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH 

·         Temperatura

 Los microorganismos mesófilos crecen de forma óptima a temperaturas entre 15 y 43ºC. Otros como los psicrófilos crecen a 0ºC y los temófilosa 80ºC o incluso a temperaturas superiores (hipertemófilos). En líneas genérales, los patógenos humanos crecen en rangos de temperatura mucho más cortos, alrededor de 37ºC, y los saprofitos tienen rangos más amplios.

·         Esterilidad del medio

 Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estériles para evitar la aparición de formas de vida