Por Quistián García Hylary
Las pruebas bioquímicas permiten determinar
las características metabólicas de las bacterias de objeto de identificación.
Algunas son rápidas, ya que evalúan la presencia de una enzima preformada y su
lectura varía entre unos segundos hasta unas pocas horas. Otras pruebas
requieren para su lectura el crecimiento del microorganismo con una incubación
previa de 18 a 48 horas.
PRUEBAS CON LECTURA INMEDIATA
·
Catalasa
La catalasa es una
enzima presente en la mayoría de los microorganismos que poseen citocromos. Las
bacterias que sintetizan la catalasa hidrolizan el Hidrogeno en agua y el
oxígeno gaseoso que se libera produce burbujas.
·
Oxidasa
Sirve para
determinar la presencia se enzimas oxidantes. La reacción de la oxidasa se debe
a la presencia de un sistema citromooxidasa que activa la oxidación del citocromo el cual es reducido por el
oxígeno molecular produciendo agua o peróxido de hidrogeno según la especie
Moraxella Helicobacter y Brucella.
·
Indol
Mediante esta
prueba se detecta la liberación de Indol en un cultivo bacteriano. Dicha
liberación se debe a la degradación del aminoácido triptófano mediante la
enzima triptófanosa.
PRUEBAS LENTAS CON LECTURA DE 18 A 48 HRS
·
Óxido-fermentación
Mediante esta
prueba se va a determinar si la utilización de los hidratos de Carbono pro
parte de un microorganismo se realiza vía oxidativa o por vía fermentativa.
·
Reducción de nitratos
Sirve para
determinar la capacidad de un organismo de reducir nitratos en nitritos. Se
utiliza para asignar bacterias a la familia Enterobacteriaceae.
·
Rojo de metilo
Es un indicador de
pH. Actúa entre un pH 4,2 y 6,3 variando desde rojo hasta amarillo
respectivamente. Mediante esta prueba se comprueba la capacidad de un
microorganismo de producir y mantener estables los productos terminales ácidos
de la fermentación ácido-mixta. Se utiliza como parte de la identificación a
nivel especie de los bacilos entéricos Gram negativos.
·
Voges-Proskauer
Permite observar si
el microorganismo fermenta la glucosa por la vía butanodiólica. Se usa en la
identificación de bacilos entéricos Gram negativos.
·
Agar de Hierro Kligler
Mediante esta
prueba se puede determinar la capacidad de un microorganismo de metabolizar un
hidrato de carbono específico incorporado en un medio de crecimiento básico; la producción o no
de gases CO2 e H2 como productos finales del metabolismo
de los hidratos de carbono. Y la producción de ácido sulfhídrico.
Por Ramírez Hernández Jessica
Las
pruebas bioquímicas son una serie de análisis clínicos que sirven a la Medicina
como apoyo a la hora de diagnosticar infecciones por bacterias.
Las
principales pruebas son:
IMVIC
El
IMVIC se compone de cuatro pruebas: Indol, Rojo de metilo, Voges-Proskauer y
Citrato. Su finalidad es identificar un organismo del grupo de los coliformes.
La presencia de estos indica contaminacion fecal.
Indol
La
prueba del indol estudia la capacidad de degradar el triptófano con producción
de Indol y metabolitos indólicos.
Rojo de Metilo
Estudia
la fermentación ácido mixta con producción de ácidos estables en el tiempo.
Voges Proskauer
Estudia
la fermentación butanodiólica con formación de un metabolito intermediario
neutro.
Técnica:
Sembrar la muestra en el medio e incubar de 24 a 48h a 37 °C. Según el volumen
del medio añadir a partes iguales el volumen de los reactivos, agitar para
exponer el medio al O2. VP POSITIVO: Color rojo-rojizo en menos de 1h. VP
NEGATIVO: Amarillo en superficie.
Citrato
Estudia
la capacidad de utilizar el citrato como única fuente de carbono.
Oxidasa
La
oxidasa estudia la presencia del enzima citocromo c oxidasa que actúa en la
cadena respiratoria del organismo.
Catalasa
Estudia
si el microorganismo posee el enzima catalasa que actúa descomponiendo el
peróxido de hidrógeno.
Coagulasa
Coágulos
formados por la reacción de la coagulasa en un tubo de ensayo.
Estudia
la producción del enzima coagulasa, capaz de coagular el plasma. Diferencia
Staphylococcus aureus de otras especies.
Ureasa
Estudia
si el microorganismo posee el enzima ureasa que cataliza la hidrólisis de la
urea.
Reducción Nitratos
Estudia
la capacidad de los microorganismos para reducir los nitratos por la presencia
de un conjunto de enzima denominado nitrato reductasa
β - D - Galactosidasa
Estudia
la capacidad de producir β - D - galactosidasa, enzima necesario para
metabolizar la lactosa.
Descarboxilasas
Estudia
si el microorganismo produce los enzimas que descarboxilan los aminoácidos
presentes en el medio.
Hidrolisis Gelatina
Estudia
la capacidad proteolítica (la capacidad de egradación de proteínas) del
microorganismo por degradación de la gelatina.
Óxido - Fermentativa o de
Hugh-Leifson
Estudia
si el microorganismo es capaz de metabolizar un hidrato de carbono por via
oxidativa o por via fermentativa.
Ácidos y gases
Estudia
la capacidad de utilizar un hidrato de carbono con la producción de ácidos y la
formación de gas.
Agar TSI
El
agar TSI estudia la utilización de la glucosa y lactosa, la producción de gas y
ácido sulfhidrico (como producto metabolico final de los aminoacidos
azufrados).
Índice Analítico de Perfil
API
20NE Sistema de detección a las 24 horas de incubación.
El
Índice Analítico de Perfil (Analytical Profile Index o API) son un conjunto de
pruebas bioquímicas que se concentran en muy poco espacio mediante el uso de
pocillos con el reactivo correspondiente ya preparado para ser usado.
Se
llenan los pocillos siguiendo las instrucciones del fabricante con la muestra
problema. Se sellan los pocillos que sean obligatorios. Se incuba la estufa a
unos 37 °C normalmente. Posteriormente se comprueba los resultados pasado el
tiempo indicado en la tira.
Los
resultados se apuntan por cada prueba bioquímica en el casillero
correspondiente, de manera que al final dará un número de varias cifras. Con
este número se puede buscar en el libro de referencia de las tiras API, el tipo
de bacteria que se tiene en la muestra.
Son
muy útiles, capaces de identificar en poco tiempo la bacteria problema
(actualmente unas 600 especies). Hay varios modelos dependiendo del uso. Por
ejemplo, si la muestra es un coprocultivo se debería usar una tira de
enterobacterias.
Por Ramos Franco Michelle
Las
pruebas bioquímicas son una serie de análisis clínicos que sirven a la Medicina
como apoyo a la hora de diagnosticar infecciones por bacterias.
Las
principales pruebas son:
Indol
La
prueba del Indol estudia la capacidad de degradar el triptófano con producción
de Indol y metabolitos indólicos.
Rojo de Metilo
Estudia
la fermentación ácido mixta con producción de ácidos estables en el tiempo.
Voges Proskauer
Estudia
la fermentación butanodiólica con formación de un metabolito intermediario
neutro.
Técnica:
Sembrar la muestra en el medio e incubar de 24 a 48h a 37 °C. Según el volumen
del medio añadir a partes iguales el volumen de los reactivos, agitar para
exponer el medio al O2. VP POSITIVO: Color rojo-rojizo en menos de 1h. VP
NEGATIVO: Amarillo en superficie.
Citrato
Estudia
la capacidad de utilizar el citrato como única fuente de carbono.
Oxidasa
La
oxidasa estudia la presencia del enzima citocromo c oxidasa que actúa en la
cadena respiratoria del organismo.
Catalasa
Estudia
si el microorganismo posee el enzima catalasa que actúa descomponiendo el
peróxido de hidrógeno.
Coagulasa
Coágulos
formados por la reacción de la coagulosa en un tubo de ensayo.
Estudia
la producción del enzima coagulosa, capaz de coagular el plasma. Diferencia
Staphylococcus aureus de otras especies.
Ureas
Estudia
si el microorganismo posee el enzima ureasa que cataliza la hidrólisis de la
urea.
Reducción Nitratos
Estudia
la capacidad de los microorganismos para reducir los nitratos por la presencia
de un conjunto de enzima denominado nitrato reductasa
β - D - Galactosidasa
Estudia
la capacidad de producir β - D - galactosidasa, enzima necesario para
metabolizar la lactosa.
Descarboxilasas
Estudia
si el microorganismo produce los enzimas que descarboxilan los aminoácidos
presentes en el medio.
Por Rascón Castrejón Lizeth
Con
frecuencia, la identidad de una especie requiere que se conozca de manera
detallada su actividad bioquímica, porque otras características no son
suficientemente distintivas o diferenciales.
En
el laboratorio disponemos de numerosas técnicas para la caracterización
bioquímica de una especie. Además de los productos finales de los procesos
metabólicos, también se necesita conocer con detalle cómo se producen estos
cambios, como ocurren paso a paso las reacciones químicas, cuáles enzimas
intervienen, cuales son los productos intermediarios además de que se deben
reconstruir las secuencias de las reacciones bioquímicas que tienen lugar
dentro de la célula. En general el microorganismo se cultiva en medios que
contienen una sustancia nutritiva específica o sustrato y después de la
incubación del cultivo se examina para ver los cambios químicos que hayan
ocurrido.
El
IMVIC se compone de cuatro pruebas: Indol, Rojo de metilo, Voges-Proskauer y
Citrato. Su finalidad es identificar un organismo del grupo de los coliformes.
La presencia de estos indica contaminación fecal.
Indol:
La prueba del indol estudia la capacidad de degradar el triptófano con
producción de Indol y metabolitos indólicos.
Rojo
de Metilo: Estudia la fermentación ácido mixto con producción de ácidos
estables en el tiempo.
Voges
Proskauer: Estudia la fermentación butanodiólica con formación de un metabolito
intermediario neutro.
Citrato:
Estudia la capacidad de utilizar el citrato como única fuente de carbono.
Oxidasa:
La oxidasa estudia la presencia del enzima citocromo c oxidasa que actúa en la
cadena respiratoria del organismo.
Catalasa:
Estudia si el microorganismo posee el enzima catalasa que actúa descomponiendo
el peróxido de hidrógeno.
Coagulasa:
Estudia la producción del enzima coagulasa, capaz de coagular el plasma.
Diferencia Staphylococcus aureus de otras especies.
Ureasa:
Estudia si el microorganismo posee el enzima ureasa que cataliza la hidrólisis
de la urea.
Reducción
Nitratos: Estudia la capacidad de los microorganismos para reducir los nitratos
por la presencia de un conjunto de enzima denominado nitrato reductasa
β
- D – Galactosidasa: Estudia la capacidad de producir β - D - galactosidasa,
enzima necesario para metabolizar la lactosa.
Descarboxilasas:
Estudia si el microorganismo produce los enzimas que descarboxilan los
aminoácidos presentes en el medio.
Hidrolisis
Gelatina: Estudia la capacidad proteolítica (la capacidad de degradación de
proteínas) del microorganismo por degradación de la gelatina.
Óxido
- Fermentativa o de Hugh-Leifson: Estudia si el microorganismo es capaz de
metabolizar un hidrato de carbono por vía oxidativa o por vía fermentativa.
Ácidos
y gases: Estudia la capacidad de utilizar un hidrato de carbono con la
producción de ácidos y la formación de gas.
Agar
TSI: El agar TSI estudia la utilización de la glucosa y lactosa, la producción
de gas y ácido sulfhídrico (como producto metabólico final de los aminoácidos
azufrados).
Por Reyes Marcial Luis Diego
Las
pruebas bioquímicas son una serie de análisis que sirven para determinar la
actividad metabólica de una cepa pura de microorganismos. Son empleadas
principalmente para la identificación y clasificación de bacterias y hongos.
IMVIC
El
IMVIC se compone de cuatro pruebas: Indol, Rojo de metilo, Voges-Proskauer y
Citrato. Su finalidad es identificar un organismo del grupo de los coliformes.
Indol: La prueba
del indol estudia la capacidad de degradar el triptófano con producción de
Indol y metabolitos indólicos.
Rojo de metilo:
Estudia la fermentación ácido mixto con producción de ácidos estables en el
tiempo.
Voges-Proskauer:
Estudia la fermentación butanodiólica con formación de un metabolito
intermediario neutro.
Citrato: Estudia
la capacidad de utilizar el citrato como única fuente de carbono.
Enzimáticas.
Oxidasa: La
oxidasa estudia la presencia del enzima citocromo c oxidasa que actúa en la
cadena respiratoria del organismo.
Catalasa:
Estudia si el microorganismo posee el enzima catalasa que actúa descomponiendo
el peróxido de hidrógeno.
Coagulasa:
Estudia la producción del enzima coagulasa, capaz de coagular el plasma.
Diferencia Staphylococcus aureus de otras especies.
Ureasa: Estudia
si el microorganismo posee el enzima ureasa que cataliza la hidrólisis de la
urea.
Reducción de
nitratos: Estudia la capacidad de los microorganismos para reducir los nitratos
por la presencia de un conjunto de enzima denominado nitrato reductasa.
B-D-Galactosidasa:
Estudia la capacidad de producir B-D-Galactosidasa, enzima necesario para
metabolizar la lactosa.
Descarboxilasa:
Estudia si el microorganismo produce los enzimas que descarboxilan los
aminoácidos presentes en el medio.
Este comentario ha sido eliminado por el autor.
ResponderEliminarLas pruebas bioquímicas permiten determinar las características metabólicas de las bacterias que son objeto de identificación.
ResponderEliminarAlgunas de estas pruebas son técnicas rápidas, ya que reaccionan con una enzima pre-formada y su lectura varía entre unos segundos hasta unas pocas horas. Otras pruebas requieren para su lectura el crecimiento del microorganismo con una
incubación previa de 18 a 48hrs; a este grupo pertenecen la mayoría de las pruebas que detectan componentes metabólicos o aquellas que determinan
la sensibilidad de un microorganismo a una sustancia dada tras cultivo en medios de
identificación que contienen el sustrato a metabolizar. A pesar de esto, algunas de estas pruebas pueden realizarse de forma rápida tras una incubación de unas 2-6hrs.
cosa bien hecha muitas gracias :)
ResponderEliminarbien gracias
ResponderEliminar