Número más probable (NMP)

Por Quistián García Hylary

Es una estrategia eficiente de estimación de densidades poblacionales especialmente cuando una evaluación cuantitativa de células individuales no es factible.

La técnica se basa en la determinación de presencia o ausencia en réplicas de diluciones consecutivas de atributos particulares de microorganismos presentes en muestras de suelos u otros ambientes. Por lo tanto, un requisito importante de este método es la necesidad de poder reconocer un atributo particular de la población en el medio de crecimiento a utilizarse. El estimado de densidad poblacional se obtiene del patrón de ocurrencia de ese atributo en diluciones seriadas y el uso de una tabla probabilística. El atributo particular a usarse en esta técnica es la capacidad de microorganismos a formar colonias en medios sólidos de crecimiento.

La metodología es la siguiente:

1)      Muestras: colecte asépticamente las muestras frescas de suelo (10 gr) de varios lugares, u obtenga muestras de agua (10 ml) de lagos, ríos o charcos.

2)      Extracción de microorganismos viables: para muestras de suelo, las células podrán ser removidas y homogenizadas añadiendo 1 gr de la muestra a un tubo de ensayo que contenga 9 ml de solución salina. Agite moderadamente por 5 minutos en un vortex.

3)      Diluciones en serie: el extracto de suelo puede ser diluido serialmente transfiriendo 1ml a un tubo con 9 ml de 0.85% NaCl. Repetir en serie el procedimiento hasta alcanzar una dilución 10^-7. Para  muestras líquidas, mezcle bien la muestra y proceda a preparar las diluciones seriadas según el procedimiento anterior.

4)      Placas Petri: utilizando un marcador, dividir la caja Petri en cinco zonas de igual tamaño. Use una caja por cada muestra. Rotule cada zona con el factor de dilución a ser inoculado.

5)      Inoculación: transfiera 5µl de la dilución apropiada al área correspondiente. Repita esta operación cinco veces por cada dilución.

6)      Permita que el inoculo seque sobre el medio de crecimiento. Selle la placa con una trilladle de parafina, invierta la placa e inocule a 25ºC por 7 días.

7)      Evaluación del crecimiento: para cada dilución es ascendencia evalué el crecimiento o No crecimiento sobre cada replica inoculada. Reporte los resultados como se indica a continuación:

DATOS Y ANALISIS

Con ayuda de la siguiente tabla, determine la población estimada para su muestra. Si el patrón de respuestas no se encuentra en la tabla, se promedia el valor estimado del patrón superior e inferior en la tabla. Estos valores son el NMP sin ajustar. Para calcular la densidad poblacional de la muestra, entonces tendrá que multiplicar el NMP sin ajustar por el factor de corrección de volumen, por el reciproco del factor de dilución menor inoculado en la placa. 

Por Ramírez Hernández Jessica

EL METODO DE NUMERO MAS PROBABLE (NMP) es una estrategia eficiente de estimación de densidades poblacionales especialmente cuando una evaluación cuantitativa de células individuales no es factible. La técnica se basa en la determinación de presencia o ausencia (pos o neg) en réplicas de diluciones consecutivas de atributos particulares de microorganismos presentes en muestras de suelo u otros ambientes. Por lo tanto, un requisito importante de este método es la necesidad de poder reconocer un atributo particular de la población(es) en el medio de crecimiento a utilizarse. El estimado de densidad poblacional se obtiene del patrón de ocurrencia de ese atributo en diluciones seriadas y el uso de una tabla probabilística. Algunas de las ventajas del NMP son: (i) la capacidad de estimar tamaños poblacionales basados en atributos relacionados a un proceso (selectividad); por ejemplo se puede determinar la densidad poblacional de organismos que pueden nodular leguminosas en una muestra de suelo usando el método de infección de plantas, (ii) provee una recuperación uniforme de las poblaciones microbianas de suelos diversificados, (iii) determina sólo organismos vivos y activos metabólicamente, y (iv) suele ser más rápido e igual de confiable que los métodos tradicionales de esparcimiento en platos de cultivo, entre otros.

METODOLOGIA

1. Muestras: Colecte asépticamente muestras frescas de suelo (10 g) de varios lugares u obtenga muestras de agua (10 ml) de lagos, ríos o charcas.

2. Extracción de microorganismos viables: Para muestras de suelo, las células podrán ser removidas y homogenizadas añadiendo 1 g de muestra a un tubo de ensayo que contenga 9 ml de solución salina. Agite moderadamente por 5 minutos en un vortex.

3. Diluciones en serie: El extracto de suelo puede ser diluido seriadamente transfiriendo 1 ml a un tubo con 9 ml de 0.85% NaCl. Cada transferencia corresponde a una dilución de 1 en 10. Repita en serie el procedimiento de dilución hasta alcanzar la dilución 10-7. Para muestras líquidas, mezcle bien la muestra y proceda a preparar las diluciones seriadas como fueron descritas anteriormente.

4. Placas Petri: Utilizando un marcador, divida la placa Petri en cinco zonas de igual tamaño. Use una placa por cada muestra. Rotule cada zona con el factor de dilución a ser inculcado.

5. Inoculación: Transfiera 5 µl de la dilución apropiada al área correspondiente. Repita esta operación cinco veces por cada dilución:

6. Permita que el inóculo seque sobre el medio de crecimiento. Selle la placa con un tirillade parafina. Invierta la placa e incube a 25°C por 7 días.

7. Evaluación de crecimiento: Para cada dilución en ascendencia evalúe el crecimiento o no crecimiento sobre cada réplica inoculada.

Datos y Análisis:

Utilizando los valores ofrecidos en la tabla 1, determine la población estimada para su muestra (ej., 5-5-3-2-0: 1,383). De su patrón de respuestas no estar en la tabla, promedie el valor estimado del patrón superior e inferior presente en la tabla 1 (ej., 5-4-1-1-0 no está en la tabla, entonces promedie 5-4-1-0-0 (169) y 5-4-2-0-0 (216) como el resultado más apropiado: 5-4-1-1-0 = (169+216)/2 = 193). Este valor obtenido es el NMP sin ajustar.

Para calcular la densidad poblacional de la muestra, entonces tendrá que multiplicar el NMP sin ajustar por el factor de corrección de volumen por el recíproco del factor de dilución menor inoculado en la placa (ej., 5-5-3-2-0: 1,383 X 200 X 1000 = 2.78 x 108 células/g de suelo).

Por Ramos Franco Michelle

En este método el número más probable es también conocido como el método de los ceros de pisson es una forma de obtener datos cuantitativos en concentración de elementos diversos a partir de datos de incidencia +/- .

Es una estrategia eficiente para estimar densidades de población que se emplean cuando una evaluación cuantitativa de elementos individuales no es favorable. El método de basar en determinar la presencia o ausencia  (+ o -)  de atributos específicos de microorganismos en copias obtenidas por diluciones consecutivas a partir de las muestras de suelos u otros ambientes

Algunas de las ventajas de NMP son:

• La capacidad de estimar tamaños poblacionales basadas en atributos relacionados a un proceso (selectividad); por ejemplo, se puede determinar la densidad poblacional de organismos que pueden hodular leguminosas en una muestra de suelo usando el método de infección de plantas
• Provee una recuperación uniforme de las poblaciones microbianas de suelos diversificados
• Determino solo organismos vivos y activos metabólicamente
• Suelen ser más rápido igual de confiable de los métodos tradicionales de espaciamiento en plantas de cultivo entre otras
• Se utiliza para contar microorganismos que son diferentes de cultivar en medio solido

Por Rangel Osorio Hugo

EL METODO DE NUMERO MAS PROBABLE (NMP) es una estrategia eficiente de estimación de densidades poblacionales especialmente cuando una evaluación cuantitativa de células individuales no es factible. La técnica se basa en la determinación de presencia o ausencia (pos o neg) en réplicas de diluciones consecutivas de atributos particulares de microorganismos presentes en muestras de suelo u otros ambientes. Por lo tanto, un requisito importante de este método es la necesidad de poder reconocer un atributo particular de la población(es) en el medio de crecimiento a utilizarse. El estimado de densidad poblacional se obtiene del patrón de ocurrencia de ese atributo en diluciones seriadas y el uso de una tabla probabilística.

1.  Muestras: Colecte asépticamente muestras frescas de suelo (10 g) de varios lugares u obtenga muestras de agua (10 ml) de lagos, ríos o charcas.
2.  Extracción de microorganismos viables: Para muestras de suelo, las células podrán ser removidas y homogenizadas añadiendo 1 g de muestra a un tubo de ensayo que contenga 9 ml de solución salina. Agite moderadamente por 5 minutos en un vortex.
3. Diluciones en serie: El extracto de suelo puede ser diluido seriadamente transfiriendo 1 ml a un tubo con 9 ml de 0.85% NaCl. Cada transferencia corresponde a una dilución de 1 en 10. Repita en serie el procedimiento de dilución hasta alcanzar la dilución 10-7. Para muestras líquidas, mezcle bien la muestra y proceda a preparar las diluciones seriadas como fueron descritas anteriormente.
4. Placas Petri: Utilizando un marcador, divida la placa Petri en cinco zonas de igual tamaño. Use una placa por cada muestra. Rotule cada zona con el factor de dilución a ser inoculado
5. Inoculación: Transfiera 5 µl de la dilución apropiada al área correspondiente. Repita esta operación cinco veces por cada dilución
6. Permita que el inóculo seque sobre el medio de crecimiento. Selle la placa con un Tirilla de parafina. Invierta la placa e incube a 25°C por 7 días.
7. Evaluación de crecimiento: Para cada dilución en ascendencia evalué el crecimiento o no crecimiento sobre cada réplica inoculada.

Por Rascón Castrejón Lizeth

El método del Número más probable (NMP) también conocido como el método de los ceros de Poisson, es una forma de obtener datos cuantitativos en concentraciones de elementos discretos a partir de datos de incidencia positiva/negativa. Es una estrategia eficiente para estimar densidades de población que se emplea cuando una evaluación cuantitativa de elementos individuales no es factible. El método se basa en determinar la presencia o ausencia (positivo o negativo) de atributos específicos de microorganismos en copias obtenidas por diluciones consecutivas a partir de muestras de suelo u otros ambientes. Se basa en el principio de que una única célula viva puede desarrollarse y producir un cultivo turbio. El método requiere la realización de una serie de diluciones en serie de la muestra de cultivo, en un medio líquido adecuado para el crecimiento de dicho organismo de un volumen diez veces mayor. Luego, se incuban las muestras de esos tubos y, pasado un tiempo, se examinan los tubos. Aquellos tubos que recibieron una o más células microbianas procedentes de la muestra, se pondrán turbios, mientras que los tubos que no recibieron ninguna célula permanecerán transparentes.

Algunas de las ventajas del NMP son:

·         La capacidad de estimar tamaños poblacionales basados en atributos relacionados a un proceso (selectividad); por ejemplo se puede determinarla densidad poblacional de organismos que pueden nodular leguminosas en una muestra de suelo usando el método de infección de plantas.

·         Provee una recuperación uniforme de las poblaciones microbianas de suelos diversificados.

·         Determina sólo organismos vivos y activos metabólicamente.

·         Suele ser más rápido e igual de confiable que los métodos tradicionales de esparcimiento en platos de cultivo, entre otros.

Se utiliza para contar microorganismos que son difíciles de cultivar en medio sólido. También se usa para determinar el número de células de un cultivo mixto que pueden crecer en un medio líquido determinado. Por ejemplo, puede emplearse para determinar la contaminación del agua potable, determinando el número de bacterias que pueden crecer en un medio que contiene lactosa. Estas bacterias probablemente sean Escherichia Coli provenientes de aguas residuales contaminadas, y la presencia de E. Coli en el agua potable es una prueba presuntiva de contaminación

Por Ríos Palacios Selene

El método del Número más probable (NMP) (Most probable number - MPN - en inglés), también conocido como el método de los ceros de Poisson, es una forma de obtener datos cuantitativos en concentraciones de elementos discretos a partir de datos de incidencia positiva/negativa. Es una estrategia eficiente para estimar densidades de población que se emplea cuando una evaluación cuantitativa de elementos individuales no es factible.

El método se basa en determinar la presencia o ausencia (positivo o negativo) de atributos específicos de microorganismos en copias obtenidas por diluciones consecutivas a partir de muestras de suelo u otros ambientes. Se basa en el principio de que una única célula viva puede desarrollarse y producir un cultivo turbio. El método requiere la realización de una serie de diluciones en serie de la muestra de cultivo, en un medio líquido adecuado para el crecimiento de dicho organismo de un volumen diez veces mayor. Luego, se incuban las muestras de esos tubos y, pasado un tiempo, se examinan los tubos. Aquellos tubos que recibieron una o más células microbianas procedentes de la muestra, se pondrán turbios, mientras que los tubos que no recibieron ninguna célula permanecerán transparentes.

Al aumentar el factor de dilución, se alcanza un punto en el que algunos tubos contendrán tan sólo un microorganismo y otros tubos no contendrán ninguno. Al calcular la probabilidad de que los tubos no hayan recibido ninguna célula, se puede estimar el número más probable de microorganismos presentes en la muestra original, a partir de una tabla estadística

Aplicación

Este método se usa para contar microorganismos difíciles de cultivar en medio sólido,o para determinar el número de células que pueden crecer en un medio líquido determinado, como el análisis para determinar la contaminación del agua potable, determinando el número de bacterias Escherichia coli que pueden crecer en un medio con lactosa. La presencia de E. coli en el agua potable es una prueba de contaminación.

En microbiología, el método se emplea habitualmente realizando diluciones en serie de un cultivo de bacterias en un medio de crecimiento, y luego divisiones adicionales en serie hasta obtener partes alícuotas. Los cultivos son incubados y evaluados a ojo, eludiendo el tedioso recuento de colonias, o el caro y tedioso recuento microscópico.